[Người Nuôi Tôm] – Viral Covert Mortality Disease (VCMD) còn được gọi là bệnh tôm chết bí ẩn do Nodavirus, một loại Nodavirus RNA sợi đơn dương tính được phân loại trong họ Nodaviridae gây ra.

Dấu hiệu của bệnh

Khi mắc bệnh, tôm nuôi có thể có những biểu hiện dưới đây, những cũng có trường hợp không biểu hiện ra bên ngoài, nhất là trong giai đoạn đầu khi nhiễm virus.

Dấu hiệu bệnh quan sát tại ao nuôi nhiễm virus: Phần lớn tôm chết ở tầng đáy và chết, có thể quan sát thấy tôm chết hàng ngày; tỷ lệ chết cao khi nhiệt độ nước thay đổi nhanh chóng, đặc biệt là trên 28^oC.

Dấu hiệu bệnh quan sát tại cá thể tôm nhiễm bệnh: Gan tụy bị teo và hoại tử; bao tử và ruột rỗng; vỏ mềm; tăng trưởng chậm; trong nhiều trường hợp, cơ bụng bị trắng và hoại tử.

VCMD trên tôm thẻ chân trắng nuôi (Penaeus vannamei). Các mũi tên màu trắng cho biết gan tụy bị teo và màu nhạt dần. Các mũi tên màu đen cho thấy các đoạn cơ bụng có màu trắng đục. (Nguồn: QL Zhang)

VCMD trên tôm thẻ chân trắng (P. vannamei) bị nhiễm bệnh thực nghiệm. Mũi tên trắng cho biết gan tụy bị teo và nhạt màu so với tôm bình thường có gan tụy sẫm màu (đầu mũi tên trắng). (Nguồn: QL Zhang)

Tác nhân gây bệnh

Viral Covert Mortality Disease (VCMD) còn được gọi là bệnh tôm chết bí ẩn do Nodavirus, một loại Nodavirus RNA sợi đơn dương tính được phân loại trong họ Nodaviridae gây ra.

Dịch tễ học

Nhiễm CMNV thường xảy ra trong vòng 30-80 ngày sau khi thả nuôi, tỷ lệ chết lên đến 80%. Trong trường hợp nghiêm trọng, nó xảy ra trong vòng 10-20 ngày sau khi thả tôm giống vào ao nuôi thương phẩm. Các trường hợp lây nhiễm không có triệu chứng được phát hiện bằng bộ dụng cụ xét nghiệm CMNV cũng được tìm thấy ở các trang trại nuôi. CMNV có thể lây truyền theo chiều ngang qua tập tính ăn thịt đồng loại của tôm. Sự lây truyền theo chiều dọc của CMNV qua tinh trùng hoặc tế bào trứng ở Exopalaemon carinicauda (Liu và cộng sự, 2017). Một số loài giáp xác hoang dã trong ao là vật trung gian truyền bệnh (Liu và cộng sự, 2018). Các loài chim di cư, côn trùng sống dưới nước và con người có thể là vật trung gian truyền bệnh cơ học…

Truyền lây theo chiều ngang

Mười một loài động vật không xương sống sống trong ao nuôi tôm được phát hiện dương tính với CMNV khi sử dụng phương pháp RTnPCR hoặc RT-LAMP. Bao Artemia sinica, Barnacle Balanus sp., Brachionus urceus, Amphipod Corophium sinense, hàu Thái Bình Dương Crassostrea gigas, cua ẩn cư Diogenes edwardsii, ngao chung Meretrix lusoria, cua ma Ocypode cordimundus, hyperiid amphipod Parathemisto gaudichaudi, cua fiddler Tubuca arcuata và một con gammarid không xác định amphipod (Liu và cộng sự, 2018). Năm loài giáp xác hoang dã, bao gồm Cor. sinense, Dio. edwardsii, Ocy. cordimanus, Par. gaudichalldi và Tub. arcuata, cũng được kiểm tra ISH dương tính với CMNV. Năm loài này cũng có thể hoạt động như vật chủ chứa CMNV trong việc truyền bệnh theo chiều ngang (Liu et al., 2018).

Hình ảnh mô học (chẩn đoán mức độ II)

Nhuộm H&E và lai tại chỗ (ISH) cho cơ hoại tử của P.vannamei bị nhiễm CMNV tự nhiên. Cơ cho thấy sự phân mảnh có xu hướng hoại tử đông tụ và tan biến (hình tam giác màu đen). Các mũi tên đen và mũi tên mở lần lượt chỉ ra các nhân karyopyknotic và tín hiệu lai màu tím của mẫu dò CMNV RNA. Thang chia vạch = 20 μm (A), 20 μm (B). (Nguồn: QL Zhang)

A và B: nhuộm H&E và ISH cho cơ hoại tử của E. carinicauda nhiễm CMNV tự nhiên. Cơ cho thấy sự phân mảnh có xu hướng hoại tử đông tụ và hòa tan (hình tam giác đen). Các mũi tên màu đen và mở các mũi tên lần lượt chỉ ra các nhân karyopyknotic và tín hiệu lai màu tím của mẫu dò CMNV. Thanh tỷ lệ = 20 μm (A và B). (Nguồn: QL Zhang)

A và B: nhuộm H&E và ISH cho biểu mô gan tụy bị teo và hoại tử của P. monodon tự nhiên bị nhiễm CMNV. Các hình tam giác màu đen và các mũi tên mở chỉ ra biểu mô hoại tử và màu tím lai tín hiệu của đầu dò CMNV, tương ứng. Thanh chia độ = 20 μm (A và B). (Nguồn: QL Zhang)

Chẩn đoán phân tử (chẩn đoán cấp độ III)

Các phương pháp dựa trên khuếch đại phiên mã ngược

Các phương pháp chẩn đoán phân tử khác nhau được thiết lập dựa trên trình tự của RNA phụ thuộc RNA polymerase (RdRp). Các phương pháp được báo cáo bao gồm:

• Một enzym phiên mã ngược, PCR lồng nhau (RT-nPCR) (Zhang, et al., 2014).
• Phương pháp RT-LAMP (Zhang và cộng sự, 2017b).
• TaqMan RT-PCR nhạy cảm (Pooljun et al., 2016).
• Khả năng tương thích cao RT-PCR thời gian thực TaqMan (Li et al., 2018b)

Đầu dò axit nucleic dựa trên phương pháp lai tại chỗ (ISH)

• Phương pháp ISH cho CMNV lần đầu tiên được mô tả vào năm 2014 (Zhang, et al., 2014).
• Một phương pháp ISH thay thế đã được công bố (Zhang, et al., 2017).

Không có sự chồng chéo trình tự giữa RT-nPCR và bất kỳ phương pháp TaqMan RT-PCR nào hoặc RTLAMP. Do đó, kết quả RT-nPCR có thể được xác minh bằng bất kỳ phương pháp RT-PCR nào của TaqMan hoặc kiểm tra RT-LAMP. Không hợp lệ để xác minh kết quả giữa RT-nPCR và ISH, hoặc giữa RTLAMP và bất kỳ phương pháp TaqMan RT-PCR nào, vì có sự chồng chéo lên các trình tự nhắm mục tiêu của các phương pháp liên quan. ISH và RT-nPCR có thể mang lại nguy cơ ô nhiễm cao cho nhau. Nó là không khuyến khích chạy hai bài kiểm tra này trong cùng một phòng hoặc không có phòng thí nghiệm chẩn đoán Chất lượng Hệ thống quản lý.

Do thiếu hoạt động hiệu đính của RdRp, các bộ gen CMNV có tính đột biến cao đặc trưng tỷ lệ này mang lại nguy cơ âm tính giả. PCR chạm xuống kết hợp với giải trình tự có thể được áp dụng để tìm ra âm tính giả do các đột biến có thể gây ra.

Tác giả: Jie Huang, Qing-Li Zhang, Nan Bai, Xiao-Yuan Wan, Hai-Liang Wang, Guo-Si Xie, Bing Yang, Xiu-Hua Wang, Chen Li, Xiao-Ling Song Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China; National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266071, China

Hiểu Lam (Lược dịch)